|
大家好我是酶标生物小编，今天我来和大家说一说
ELISA
实验疑难解析，希望对你们有所帮助哦！
1、显色极浅或不显色
（
1）漏加底物成分、底物失效、底物配制浓度计算错误；
（
2）整个ELISA过程中存在抗原或ob体育app官网下载不匹配；
（
3）整个ELISA过程中样品稀释过度；
（
4）稀释体系错误，如使用含蛋白质成分的试剂进行包被。
2、全板阳性
（
1）酶标抗原或ob体育app官网下载浓度过高，尝试降低浓度；
（
2）使用的封闭试剂不正确，或者未封闭；
（
3）酶标抗原或ob体育app官网下载与体系中其他试剂有结合；
（
4）底物被酶标抗原或ob体育app官网下载污染。
3、不均匀显色
（
1）酶标板质量问题，重新检测酶标板均一性；
（
2）包被或加样过程中有部分孔漏加、少加等情况，可能是操作者不细心，也可能是移液器漏气；
（
3）加样时移液器打入太多气泡；
（
4）选购的酶标板不正确，可能误选其他用途的板子；
（
5）温育过程中板子叠放过厚；
（
6）加样或稀释过程中试剂没有充分混匀，或稀释梯度计算错误；
（
7）洗板失误，部分孔未加洗涤液或洗涤液加入去垢剂后未充分混匀，或洗涤过程中带入气泡。
4、显色过快
（
1）酶标抗原或ob体育app官网下载浓度过高；
（
2）某一试剂浓度过高。
5、显色过慢
（
1）酶标抗原或ob体育app官网下载浓度过底，或者标记效率低，或者标记后免疫活性受影响；
（
2）试剂被污染，如HRP酶标记的抗原或ob体育app官网下载被叠氮钠污染；
（
3）反应温度过低；
（
4）底物缓冲液pH不正确。
6、背景深
（
1）酶标抗原或ob体育app官网下载浓度过高；
（
2）ob体育app官网下载的非特异性结合；
（
3）抗原或ob体育app官网下载不纯；
（
4）二抗的种属交叉识别。
|
